302.0102. Исследование агрегации тромбоцитов методом оптической агрегатометрии (индуктор - АДФ, от 4 до 8 концентраций индуктора)

Исследуемый биоматериал
Кровь из вены.


Синонимы
Агрегация тромбоцитов с АДФ. Агрегация тромбоцитов с аденозиндифосфорной кислотой. Индуцированная агрегация тромбоцитов.


Краткое описание
Это исследование способности тромбоцитов соединяться друг с другом в агрегаты под действием индуктора агрегации – аденозиндифосфорной кислоты (АДФ). Исследование агрегации тромбоцитов с АДФ используется для оценки состояния тромбоцитарного звена гемостаза, диагностики врожденных и приобретенных тромбоцитопатий, оценки риска тромбозов, кровотечений и вызываемых ими заболеваний, контроля за антиагрегантной и проагрегантной терапией. Исследование агрегации тромбоцитов - единственное из всех клинических лабораторных исследований, проводимое на живых клетках.


Подготовка к исследованию
Пациент не должен принимать пищу за 10-12 часов перед визитом в лабораторию, можно только пить воду без газа. За день до сдачи анализов необходимо избегать стресса, физических нагрузок, смены режима дня, питания, приема алкоголя. 30 минут перед забором крови нужно соблюдать покой, не нервничать, не курить. Пациенту необходимо обязательно сообщить медицинскому персоналу о получаемых им лекарственных препаратах.


Читать подробнее о Правилах подготовки к лабораторным исследованиям


Факторы, влияющие на результаты
Определяемая в ходе исследования функциональная активность тромбоцитов и их способность к агрегации могут занижаться проводимой антиагрегантной терапией, приемом аспирина, адреноблокаторов, нестероидных противовоспалительных препаратов, стероидных гормонов, ингибиторов АПФ, гормональных контрацептивов, антибиотиков, антибактериальных препаратов, антидепрессантов, мочегонных, клофибрата, дипиридамола, пропроналола. К получению завышенных результатов может приводить курение. Также результаты могут быть искажены при проведении исследования не натощак, нарушениях липидного обмена, сопровождающихся выраженной липемией.


Читать подробнее о Факторах, влияющих на результат лабораторных исследований


Подробная информация об исследовании
Агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная - увеличивает риск кровотечений. При избыточной агрегации в первую очередь нарушается проходимость капилляров и мелких сосудов. Это может привести к ухудшению кровоснабжения головного мозга и развитию инсульта.

Аденозиндифосфорная кислота (АДФ) – это один из естественных физиологических активаторов тромбоцитов. Она содержится в гранулах внутри самих тромбоцитов, накапливается в крови в области повреждения сосуда. Связываясь с P2Y12 рецепторами на мембране тромбоцитов, АДФ активирует их. В ответ тромбоциты меняют свою форму, у них появляются псевдоподии (отростки), на их поверхность выделяются вещества с прокоагулянтными свойствами. На поверхности тромбоцитов появляются GPIIb-IIIa рецепторы (для фибриногена) и развивается первичная кальций-зависимая агрегация. Затем происходит активация простагландин-тромбоксановой системы, из внутренних гранул тромбоцитов в кровь высвобождаются содержащиеся в них собственные эндогенные индукторы (фактор Виллебранда, бета-тромбоглобулин, тромбоспандин, фибронектин, фибриноген, 4-й тромбоцитарный фактор, V-й, XIII-й факторы свертывания, бета-тромбоглобулин и др.), что вызывает вторичную агрегацию. АДФ оказывает на тромбоциты выраженный дозозависимый эффект, при котором ответная реакция тромбоцитов, интенсивность, скорость и обратимость агрегации зависят от используемой стартовой концентрации индуктора. Такая особенность позволяет, используя разные концентрации АДФ, получать важную диагностическую информацию о функциональной активности тромбоцитов, риске тромбоза или кровотечений, эффективности антиагрегантной терапии.

Результатом исследования является агрегатограмма. Это график, иллюстрирующий образование тромбоцитарных агрегатов в процессе исследования. Измеряются задержка развития агрегации, скорость развития агрегации, максимальная и финальная амплитуда агрегации, интенсивность дезагрегации. Каждый из этих параметров характеризуется диапазоном нормальных значений, который зависит от использованной концентрации АДФ. Диагностическое значение имеют на только их численные значения, но, в не меньшей степени, форма агрегатограммы. В зависимости от концентрации АДФ и состояния самих тромбоцитов, их агрегация может быть обратимой или необратимой, завершенной или не завершенной, одноволновой или двухволновой.


Показания к назначению
Обследование назначается при склонности к тромбозам или кровотечениям, сердечно-сосудистых заболеваниях, невынашивании беременности, диагностике врожденных и наследственных тромбоцитопатий, контроле за антиагрегантной или проагрегантной терапией.


Референсный интервал
Индивидуален для каждого параметра агрегатограммы, зависит от действующей концентрации АДФ и использованного оборудования. Указывается на бланке результата исследования.


Интерпретация результата
При концентрации АДФ 0,1-0,5 мкмоль/л наблюдается не интенсивная, быстро и полностью обратимая агрегация. При концентрации АДФ 1-2 мкмоль/л наблюдается более интенсивная двухволновая (двухфазная) агрегация с минимальной дезагрегацией. Первая волна агрегации возникает в ответ на стартовое действие АДФ, содержащегося в реактиве. Если начавшаяся под действием стартовой дозы АДФ агрегация не поддерживается ответным выходом из тромбоцитов их собственных эндогенных индукторов, она оказывается не интенсивной, быстро затухает, сопровождается активной дезагрегацией и, как правило, полностью обратима. Вторая волна агрегации возникает в ответ на выход из активированных тромбоцитов собственных эндогенных индукторов. Эта вторая волна чаще более интенсивная, чем первая и ее возникновение практически исключает последующую дезагрегацию. При концентрации АДФ 5-20 мкмоль/л наблюдается еще более интенсивная агрегация. Она почти всегда одноволновая, поскольку развитие второй волны происходит очень быстро и, поэтому, незаметно, дезагрегация практически отсутствует. В любом случае, задержка развития агрегации тем короче, а скорость развития агрегации тем больше, чем выше используемая концентрация АДФ. Таков характер агрегатограмм при использовании АДФ у здорового человека.

Исследование начинается с воздействия на тромбоциты средними концентрациями АДФ (1-5 мкмоль/л). При получении результатов, характерных для гиперагрегации, исследование продолжают, используя более низкие концентрации АДФ (0,1-0,5 мкмоль/л). При признаках гипоагрегации используют более высокие концентрации АДФ (10-20 мкмоль/л). Такой поэтапный подход позволяет объективно оценить функциональную активность тромбоцитов.

При сниженной, обратимой агрегации тромбоцитов у пациента повышен риск кровотечений, при чрезмерно интенсивной, полностью необратимой агрегации возрастает риск тромботических осложнений.

Отклонения от нормы характерны для врожденных или приобретенных тромбоцитопатий, проявляющихся нарушением адгезии и агрегации (болезнь Виллебранда, синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана, синдром Скотта, дефекты пулов хранения и др.), а также проводимой антиагрегантной или проагрегантной терапии. Например, при болезни Виллебранда и синдроме Бернара-Сулье, дефекте рецепторов GP Ia/IIa и GP5 (рецепторы коллагена) первая и вторая волна агрегации тромбоцитов с АДФ, как правило, соответствуют норме. При тромбастении Гланцмана агрегация тромбоцитов с АДФ отсутствует, даже при максимальной концентрации индуктора. При синдроме «серых» тромбоцитов, дефиците т.н. плотных гранул (дефекты пула хранения), нарушении секреции эндогенных индукторов снижается интенсивность первой и, особенно, второй волны агрегации с АДФ, за которой следует активная дезагрегация. Дефект активности тромбоцитарных фосфолипаз и тромбоксансинтетазы сопровождается умеренным снижением активности агрегации с АДФ, преимущественно вызванным нарушением формирования ее второй волны. Тяжелая гипофибриногенемия, афибриногенемия ведут к снижению или полному отстутствию агрегации с АДФ. Антиагрегантная терапия с использованием блокаторов P2Y12 рецепторов (клопидогрель, тиклопидин) вызывает резкое, дозозависимое снижение интенсивности агрегации с АДФ. Аспирин и другие нестероидные противовоспалительные препараты ведут к более умеренному (по сравнению с блокаторами P2Y12 рецепторов) снижению интенсивности агрегации с АДФ с нарушением формирования ее второй волны, у многих пациентов агрегация с АДФ на фоне приема этих препаратов может оставаться нормальной. Адекватная проагрегантная терапия ожидаемо ведет к дозозависимому повышению интенсивности и скорости развития агрегации с АДФ. Во всех случаях интерпретация агрегатограмм требует знания особенностей используемого оборудования.

Метод исследования
Фотометрия.

Единицы измерения
Для амплитуды агрегации и дезагрегации - % (проценты).
Для задержки развития агрегации – сек. (секунды).
Для скорости развития агрегации - %/сек (процент в секунду).

Используемое оборудование
Автоматический коагулометр «CS-2000i» («Sysmex», Япония).