302.0303. Потоковая динамическая агрегатометрия (исследование ингибирования P2Y12-рецепторов тромбоцитов и индивидуальной чувствительности к антиагрегантам)

Синонимы

Динамический анализ функции тромбоцитов, проточная агрегатометрия, исследование функции тромбоцитов в условиях гемодинамического сдвига, агрегация тромбоцитов с АДФ. Индуцированная агрегация тромбоцитов.

Краткое описание

Это исследование способности тромбоцитов соединяться друг с другом в агрегаты под действием индуктора агрегации – аденозиндифосфорной кислоты (АДФ). Исследование применяется для оценки в условиях, максимально приближенных к физиологическим, сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза, агрегантной и адгезивной функции тромбоцитов, диагностики врожденных и приобретенных тромбоцитопатий, риска кровотечений, контроля за антиагрегантной терапией и нарушения чувствительности к блокаторам пуринэргических рецепторов (клопидогрелу и тикагрелору). Исследование агрегации тромбоцитов - единственное из всех клинических лабораторных исследований, проводимое на живых клетках.

Исследуемый биоматериал

Кровь из вены.

Подготовка к исследованию

За 30 минут перед взятием крови нужно соблюдать покой, не нервничать, не курить. Пациенту необходимо обязательно сообщить медицинскому персоналу о всех получаемых им лекарственных препаратах.

Факторы, влияющие на результаты

Определяемая в ходе исследования функциональная активность тромбоцитов, их способность к агрегации и адгезии может занижаться проводимой антиагрегантной терапией, приемом, адреноблокаторов, нестероидных противовоспалительных средств (НПВС), стероидных гормонов, ингибиторов АПФ, гормональных контрацептивов, антибиотиков, антибактериальных препаратов, антидепрессантов, мочегонных, клофибрата, дипиридамола, пропроналола. К получению завышенных результатов может приводить курение.

Подробная информация об исследовании

Агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная – увеличивает риск кровотечений. При избыточной агрегации в первую очередь нарушается проходимость капилляров и мелких сосудов. Это может привести к ухудшению кровоснабжения головного мозга и развитию инсульта.

Аденозиндифосфорная кислота (АДФ) – это один из естественных физиологических активаторов тромбоцитов. Она содержится в гранулах внутри самих тромбоцитов, накапливается в крови в области повреждения сосуда. Связываясь с P2Y12 рецепторами на мембране тромбоцитов, АДФ активирует их. В ответ тромбоциты меняют свою форму, у них появляются псевдоподии (отростки), на их поверхность выделяются вещества с прокоагулянтными свойствами. На поверхности тромбоцитов появляются GPIIb-IIIa рецепторы (для фибриногена) и развивается первичная кальций-зависимая агрегация.

В ответ на активацию АДФ тромбоциты меняют свою форму, у них появляются псевдоподии (отростки). Происходит активация простагландин-тромбоксановой системы, из внутренних гранул тромбоцитов в кровь высвобождаются содержащиеся в них собственные эндогенные индукторы (фактор Виллебранда, β-тромбоглобулин, тромбоспандин, фибронектин, фибриноген, 4-й тромбоцитарный фактор, факторы свертывания V и XIII, др.), обладающие сильными проагрегантными свойствами.

На поверхности активированных тромбоцитов «включаются» GPIIb-IIIa рецепторы. С помощью этих рецепторов тромбоцит связывает на своей поверхности до 40000 молекул фибриногена. Формирующиеся «фибриновые мостики» соединяют тромбоциты между собой – это основной механизм агрегации тромбоцитов. GPIIb-IIIa рецепторы связываются не только с фибриногеном, но и с фактором Виллебранда, что важно для эффективной агрегации и адгезии тромбоцитов в условиях высокой скорости кровотока.

Индуцированная АДФ агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная – увеличивает риск кровотечений.

При потоковой динамической агрегатометрии, в отличие от оптической агрегатометрии (по Борну), используется цельная кровь. Само исследование, как следует из его названия, проводится в потоке, то есть в условиях гемодинамического сдвига, для чего используются одноразовые картриджи. Устройство картриджа моделирует агрегацию тромбоцитов в поврежденном сосуде, регистрируя время, которое занимает этот процесс.

Образование агрегатов происходит на микромембране при прохождении через нее крови под давлением. На мембрану нанесен индуктор агрегации – АДФ. Кровь пропускается через апертуру в мембране со скоростью, имитирующей условия, в которых находятся тромбоциты в сосудистом русле. Окклюзия апертуры происходит по мере формирования тромбоцитарной «пробки» и регистрируется по изменению перфузионного давления в картридже. Это максимально приближает поточную динамическую агрегатометрию к естественным физиологическим условиям, за счет чего обеспечивается учет всех этапов межклеточных взаимодействий, активации, адгезии и агрегации тромбоцитов.

Важное преимущество потоковой динамической агрегатометрии состоит в том, что ее результат зависит не только от свойств тромбоцитов, но также их концентрации и реологических свойств крови. В отличие от оптической или импедансной агрегатометрии, потоковая динамическая агрегатометрия дает врачу количественную и визуально понятную оценку замедления сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Малое время исследования позволяет быстро получить результат, оценить риск возникновения у пациента кровотечений или тромбозов.

Показания к назначению

Обследование назначается при склонности к кровотечениям или тромбозам, диагностике врожденных и наследственных тромбоцитопатий, сердечно-сосудистых заболеваниях, контроле за антиагрегантной терапией.

Референсный интервал нормальных значений

< 106 секунд.

Интерпретация результата

Результатом исследования является агрегатограмма. Это график, иллюстрирующий замедление скорости кровотока через апертуру картриджа по мере образования тромбоцитарных агрегатов в процессе исследования.

Чем медленнее снижается скорость кровотока и чем позднее наступает полная окклюзия апертуры, тем более замедлен сосудисто-тромбоцитарный гемостаз. Соответственно, тем больше риск развития геморрагического синдрома, прежде всего по микроциркуляторному типу. Верно и обратное. Чем быстрее снижается скорость кровотока и чем раньше происходит полная окклюзия апертуры, тем больше риск развития тромбозов, связанных с нарушением сосудистой микроциркуляции.

Большей чувствительностью поточная динамическая агрегатометрия обладает при диагностике геморрагических нарушений, а не тромбофилий. Это связано с диапазоном изменения скорости кровотока через апертуру картриджа.

Отклонения от нормы характерны для врожденных и приобретенных тромбоцитопатий, проявляющихся нарушением адгезии и агрегации (болезнь Виллебранда, синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана, синдром Скотта, дефекты пулов хранения и др.), а также проводимой антиагрегантной терапии.

Например, при болезни Виллебранда, синдроме «серых» тромбоцитов, дефиците так называемых плотных гранул, дефиците активности тромбоцитарных фосфолипаз и тромбоксансинтетазы, тяжелой гипофибриногенемии и афибриногенемии окклюзия аппертуры картриджа замедляется в несколько раз. При тромбастении Гланцмана окклюзия апертуры не наступает за все время исследования.

Антиагрегантная терапия вызывает резкое, дозозависимое замедление окклюзии апертуры. Аспирин и другие НПВС ведут к более умеренному (по сравнению с блокаторами P2Y12 рецепторов) замедлению окклюзии апертуры. Во всех случаях интерпретация поточной агрегатометрии требует опыта и знания используемого оборудования.

Метод исследования

Анализ функции тромбоцитов методом индуцированной агрегатометрии в условиях гемодинамического сдвига.

Единицы измерения

Секунды.

Используемое оборудование

Агрегометр «PFA-200» («Siemens Healthcare Diagnostics», США)