302.0104. Исследование агрегации тромбоцитов методом оптической агрегатометрии (индуктор - коллаген, от 1 до 4 концентраций индуктора)

Исследуемый биоматериал
Кровь из вены.


Синонимы
Агрегация тромбоцитов с коллагеном. Индуцированная агрегация тромбоцитов.


Краткое описание
Это исследование способности тромбоцитов соединяться друг с другом в агрегаты под действием индуктора агрегации – коллагена. Исследование агрегации тромбоцитов с коллагеном используется для оценки состояния тромбоцитарного звена гемостаза, диагностики врожденных и приобретенных тромбоцитопатий, оценки риска тромбозов, кровотечений и вызываемых ими заболеваний, контроля за антиагрегантной и проагрегантной терапией. Исследование агрегации тромбоцитов - единственное из всех клинических лабораторных исследований, проводимое на живых клетках.


Подготовка к исследованию
Пациент не должен принимать пищу за 10-12 часов перед визитом в лабораторию, можно только пить воду без газа. За день до сдачи анализов необходимо избегать стресса, физических нагрузок, смены режима дня, питания, приема алкоголя. 30 минут перед забором крови нужно соблюдать покой, не нервничать, не курить. Пациенту необходимо обязательно сообщить медицинскому персоналу о получаемых им лекарственных препаратах.


Читать подробнее о Правилах подготовки к лабораторным исследованиям


Факторы, влияющие на результаты
Определяемая в ходе исследования функциональная активность тромбоцитов и их способность к агрегации могут занижаться проводимой антиагрегантной терапией, приемом аспирина, адреноблокаторов, нестероидных противовоспалительных препаратов, стероидных гормонов, ингибиторов АПФ, гормональных контрацептивов, антибиотиков, антибактериальных препаратов, антидепрессантов, мочегонных, клофибрата, дипиридамола, пропроналола. К получению завышенных результатов может приводить курение. Также результаты могут быть искажены при проведении исследования не натощак, нарушениях липидного обмена, сопровождающихся выраженной липемией.


Читать подробнее о Факторах, влияющих на результат лабораторных исследований


Подробная информация об исследовании
Коллагены – одни из самых распространенных белков, к ним относится 25% всего белка в организме человека. Коллаген входит в состав межклеточного матрикса и соединительных тканей. Он образует эластичный каркас сосуда и находится под эндотелием, в т.н. субэндотелиальном слое сосудистой стенки. Пока коллаген прикрыт эндотелиальными клетками, он не оказывает влияния на свертывающую систему крови. При повреждении сосуда и нарушении целостности эндотелия, коллаген вступает в непосредственный контакт с клетками и компонентами плазмы крови, запуская сложные, взаимосвязанные процессы активации гемостаза. В этих процессах большое значение имеет действие, которое коллаген оказывает на тромбоциты. Оно реализуется через рецепторы на поверхности тромбоцитов и компоненты плазмы крови. Среди компонентов плазмы крови, наиболее важные функции по взаимодействию с тромбоцитами выполняет фактор Виллебранда. Этот высокомолекулярный гликопротеид синтезируется в эндотелиальных клетках, содержится в гранулах самих тромбоцитов.

Коллаген обладает высоким сродством к фактору Виллебранда. Связываясь с рецептором GPIb-V-IX на поверхности тромбоцитов и коллагеном, фактор Виллебранда играет роль молекулярного «клея», обеспечивая адгезию тромбоцитов к поврежденному участку сосудистой стенки. Это не единственный механизм тромбоцитарной адгезии. На поверхности тромбоцитов есть еще специфические рецепторы GPIa-IIb и GPVI для непосредственной связи с коллагеном. Эти рецепторы тоже обеспечивают адгезию тромбоцитов к области повреждения сосуда. Коллаген обеспечивает не только адгезию тромбоцитов. Связываясь с рецепторами GPIa-IIb, GPVI и, через фактор Виллебранда с рецепторами GPIb-V-IX, коллаген интенсивно активирует тромбоциты. В ответ на активацию тромбоциты меняют свою форму, у них появляются псевдоподии (отростки). Происходит запуск простагландин-тромбоксановой системы, из внутренних гранул тромбоцитов в кровь высвобождаются содержащиеся в них собственные эндогенные индукторы (фактор Виллебранда, бета-тромбоглобулин, тромбоспандин, фибронектин, фибриноген, 4-й тромбоцитарный фактор, V-й, XIII-й факторы свертывания, бета-тромбоглобулин и др.). Эти вещества обладают прокоагулянтными и, что важно, сильными проагрегантными свойствами. На поверхности активированных тромбоцитов «включаются» GPIIb-IIIa рецепторы. С помощью этих рецепторов тромбоцит связывает на своей поверхности до 40000 молекул фибриногена. Формирующиеся «фибриновые мостики» соединяют тромбоциты между собой – это основной механизм агрегации тромбоцитов. GPIIb-IIIa рецепторы связываются не только с фибриногеном, но и с фактором Виллебранда, что важно для эффективной агрегации тромбоцитов в условиях высокой скорости кровотока. Так адгезия к субэндотелиальным, содержащим коллаген структурам и действие коллагена на тромбоциты ведет к их рецепторной активации, выбросу индукторов из гранул хранения и, в итоге - к развитию интенсивной агрегации. Индуцированная коллагеном агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная - увеличивает риск кровотечений. При избыточной агрегации в первую очередь нарушается проходимость капилляров и мелких сосудов. Это может привести к ухудшению кровоснабжения головного мозга и развитию инсульта.

Такие свойства коллагена обусловили его применение в качестве индуктора для лабораторного исследования агрегации тромбоцитов. Результатом исследования является агрегатограмма. Это график, иллюстрирующий образование тромбоцитарных агрегатов в процессе исследования. Измеряются задержка развития агрегации, скорость развития агрегации, максимальная и финальная амплитуда агрегации, интенсивность дезагрегации. Каждый из этих параметров характеризуется диапазоном нормальных значений, который зависит от концентрации коллагена. Диагностическое значение имеют на только их численные значения, но, в не меньшей степени, форма агрегатограммы. В зависимости от концентрации индуктора и состояния самих тромбоцитов, их агрегация может быть обратимой или необратимой, завершенной или не завершенной, одноволновой или двухволновой.


Показания к назначению
Обследование назначается при склонности к тромбозам или кровотечениям, сердечно-сосудистых заболеваниях, невынашивании беременности, диагностике врожденных и наследственных тромбоцитопатий, контроле за антиагрегантной или проагрегантной терапией.


Референсный интервал
Индивидуален для каждого параметра агрегатограммы, зависит от действующей концентрации коллагена и использованного оборудования. Указывается на бланке результата исследования.


Интерпретация результата
Коллаген считается сильным индуктором и при используемых концентрациях в норме, как правило, вызывает одноволновую, завершенную, практически необратимую агрегацию. Интенсивность дезагрегации с коллагеном минимальна. Исследование начинается с воздействия на тромбоциты средними концентрациями коллагена (2-2,5 мкг/мл). При получении результатов, характерных для гиперагрегации, исследование продолжают, используя более низкие концентрации коллагена (1-1,25 мкг/мл). При признаках гипоагрегации используют более высокие концентрации коллагена (5 мкг/мл). Такой поэтапный подход позволяет объективно оценить функциональную активность тромбоцитов.

При сниженной, замедленной, обратимой агрегации тромбоцитов у пациента повышен риск кровотечений, при чрезмерно интенсивной, полностью необратимой агрегации возрастает риск тромботических осложнений.

Отклонения от нормы характерны для врожденных или приобретенных тромбоцитопатий, проявляющихся нарушением адгезии и агрегации (болезнь Виллебранда, синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана, синдром Скотта, дефекты пулов хранения и др.), а также проводимой антиагрегантной или проагрегантной терапии. Например, при болезни Виллебранда и синдроме Бернара-Сулье агрегация тромбоцитов с коллагеном, как правило, соответствуют норме, иногда может быть умерено снижена. При дефекте рецепторов GP Ia/IIa и GP5, низкой концентрации фибриногена агрегация тромбоцитов с коллагеном отсутствует или значительно снижается. При тромбастении Гланцмана агрегация с коллагеном практически отсутствует. При синдроме «серых» тромбоцитов, дефиците плотных гранул (дефекты пула хранения), нарушениях секреции эндогенных индукторов интенсивность агрегации с коллагеном снижается, степень снижения может быть разной. Дефект активности тромбоцитарных фосфолипаз и тромбоксансинтетазы ведет к умеренному снижению интенсивности агрегации с коллагеном. Антиагрегантная терапия с использованием блокаторов P2Y12 рецепторов (клопидогрель, тиклопидин) вызывает умеренное снижение интенсивности агрегации с коллагеном, у некоторых пациентов интенсивность агрегации с коллагеном остается нормальной. Аспирин и другие нестероидные противовоспалительные препараты ведут к дозозависимому снижению интенсивности агрегации с коллагеном (при концентрации коллагена 1-2 мкг/мл интенсивность агрегации снижается, иногда значительно, при концентрации коллагена 5 мкг/мл она остается нормальной).

Проагрегантная терапия практически не усиливает агрегацию с коллагеном, за исключением случаев с исходной гипоагрегацией. Во всех случаях интерпретация агрегатограмм требует знания особенностей используемого оборудования.


Метод исследования
Фотометрия.


Единицы измерения
Для амплитуды агрегации и дезагрегации - % (проценты).
Для задержки развития агрегации – сек. (секунды).
Для скорости развития агрегации - %/сек (процент в секунду).


Используемое оборудование
Автоматический коагулометр «CS-2000i» («Sysmex», Япония).