302.0105. Исследование агрегации тромбоцитов методом оптической агрегатометрии (индуктор - арахидоновая кислота, от 1 до 3 концентраций индуктора)

Исследуемый биоматериал
Кровь из вены.


Синонимы
Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой. Индуцированная агрегация тромбоцитов.


Краткое описание
Это исследование способности тромбоцитов соединяться друг с другом в агрегаты под действием индуктора агрегации – арахидоновой кислоты. Исследование агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой используется для оценки состояния тромбоцитарного звена гемостаза, диагностики врожденных и приобретенных тромбоцитопатий, оценки риска тромбозов, кровотечений и вызываемых ими заболеваний, контроля за антиагрегантной и проагрегантной терапией. Исследование агрегации тромбоцитов - единственное из всех клинических лабораторных исследований, проводимое на живых клетках.


Подготовка к исследованию
Пациент не должен принимать пищу за 10-12 часов перед визитом в лабораторию, можно только пить воду без газа. За день до сдачи анализов необходимо избегать стресса, физических нагрузок, смены режима дня, питания, приема алкоголя. 30 минут перед забором крови нужно соблюдать покой, не нервничать, не курить. Пациенту необходимо обязательно сообщить медицинскому персоналу о получаемых им лекарственных препаратах.


Читать подробнее о Правилах подготовки к лабораторным исследованиям


Факторы, влияющие на результаты
Определяемая в ходе исследования функциональная активность тромбоцитов и их способность к агрегации могут занижаться проводимой антиагрегантной терапией, приемом аспирина, адреноблокаторов, нестероидных противовоспалительных препаратов, стероидных гормонов, ингибиторов АПФ, гормональных контрацептивов, антибиотиков, антибактериальных препаратов, антидепрессантов, мочегонных, клофибрата, дипиридамола, пропроналола. К получению завышенных результатов может приводить курение. Также результаты могут быть искажены при проведении исследования не натощак, нарушениях липидного обмена, сопровождающихся выраженной липемией.


Читать подробнее о Факторах, влияющих на результат лабораторных исследований


Подробная информация об исследовании
Агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная - увеличивает риск кровотечений. При избыточной агрегации в первую очередь нарушается проходимость капилляров и мелких сосудов. Это может привести к ухудшению кровоснабжения головного мозга и развитию инсульта.

Арахидоновая кислота образуется в тромбоцитах и эндотелиальных клетках. В тромобцитах из образовавшейся арахидоновой кислоты при поочередном действии ферментов циклооксигеназы (ЦОГ), тромбоксансинтетазы и эндоперекисей синтезируется тромбоксан. Тромбоксан обладает выраженным сосудосуживающим эффектом, активно стимулирует адгезию тромбоцитов. В физиологических условиях in vivo тромбоксан является самым мощным известным стимулятором агрегации тромбоцитов. В эндотелиальных клетках из арахидоновой кислоты образуется простациклин и простагландины, игибирующие агрегацию тромбоцитов. С этими соединениями в значительной мере связаны антикоагулянтные и антиагрегантные свойства сосудистого эндотелия.

На этих процессах основано применение лекарственных препаратов, действие которых вызвано подавлением активности фермента циклооксигеназы. Такие препараты, используемые для профилактики тромбозов, объединяются в группу ингибиторов циклооксигеназы (ЦОГ) и обладают выраженным антиагрегантным действием. К ним, в частности, относится ацетилсалициловая кислота (аспирин) и нестероидные противовоспалительные препараты. Тромбоциты, как неполноценные клетки, не обладающие метаболической активностью и не способные ресинтезировать ЦОГ, под воздействием этих лекарственных препаратов в значительной мере утрачивают способность к агрегации. Эндотелиальные клетки, будучи функционально полноценными, восстанавливают активность ЦОГ, сохраняя способность к синтезу простгландинов, простациклинов и предотвращению свертывания крови.

При использовании арахидоновой кислоты в качестве индуктора агрегации, она активирует тромбоциты напрямую, без участия специфических рецепторов. Арахидоновая кислота проникает в тромбоциты, вызывая образование тромбоксана. Эта особенность активации тромбоцитов арахидоновой кислотой – без ее воздействия на специфические рецепторы и высвобождения из тромбоцитов собственных эндогенных индукторов агрегации, используется для дифференцировки нарушений, связанных с пулом хранения и циклооксигеназным путем активации. Зная механизм действия арахидоновой кислоты становится понятно ее использование в лабораторной диагностике для контроля за антиагрегантной терапией ингибиторами ЦОГ (напр. аспирином). Прием таких препаратов делает тромбоциты нечувствительными к арахидоновой кислоте, как индуктору агрегации, а использование разных ее концентраций позволяет точнее охарактеризовать этот эффект. Используются концентрации арахидоновой кислоты 0,5, 1 и 1,5 мМ/л.

Результатом исследования является агрегатограмма. Это график, иллюстрирующий образование тромбоцитарных агрегатов в процессе исследования. Измеряются задержка развития агрегации, скорость развития агрегации, максимальная и финальная амплитуда агрегации, интенсивность дезагрегации. Каждый из этих параметров характеризуется диапазоном нормальных значений, который зависит от использованной концентрации арахидоновой кислоты. Диагностическое значение имеют на только их численные значения, но, в не меньшей степени, форма агрегатограммы. В зависимости от концентрации арахидоновой кислоты и состояния самих тромбоцитов, их агрегация может быть обратимой или необратимой, завершенной или не завершенной. Поскольку арахидоновая кислота не приводит к высвобождению из тромбоцитов эндогенных индукторов агрегации, при ее использовании истинная вторая волна на агрегатограмме отсутствует.


Показания к назначению
Обследование назначается при склонности к тромбозам или кровотечениям, сердечно-сосудистых заболеваниях, невынашивании беременности, диагностике врожденных и наследственных тромбоцитопатий, контроле за антиагрегантной терапией препаратами из группы ингибиторов циклооксигеназы (ЦОГ). Использование такой терапии – основная причина для исследования агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой.


Референсный интервал
Индивидуален для каждого параметра агрегатограммы, зависит от действующей концентрации арахидоновой кислоты и использованного оборудования. Указывается на бланке результата исследования.


Интерпретация результата
При воздействии арахидоновой кислотой развивается одноволновая, необратимая агрегация. Иногда на агрегатограмме отмечаются признаки второй волны агрегации, обусловленные замедленным характером ее развития. Скорость развития агрегации и интенсивность дезагрегации зависит от используемой концентрации арахидоновой кислоты: чем она выше, тем быстрее развивается агрегация тромбоцитов и тем меньше последующая дезагрегация. Таков характер агрегатограмм при использовании арахидоновой кислоты у здорового человека. При сниженной, обратимой агрегации тромбоцитов у пациента повышен риск кровотечений, при чрезмерно интенсивной, полностью необратимой агрегации возрастает риск тромботических осложнений.

Отклонения от нормы характерны для врожденных или приобретенных тромбоцитопатий, проявляющихся нарушением адгезии и агрегации (болезнь Виллебранда, синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана, синдром Скотта, дефекты пулов хранения и др.), а также проводимой антиагрегантной или проагрегантной терапии. При болезни Виллебранда, синдроме Бернара-Сулье, дефекте рецептора GP Ia/IIa и GP5 (рецептор коллагена), нарушении пулов хранения (напр. синдроме «серых» тромбоцитов), аномалии тромбоцитарных фосфолипаз агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой соответствуют норме. При тромбастении Гланцмана агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой отсутствует. Дефекты активности тромбоксансинтетазы, тяжелая гипофибриногенемия, афибриногенемия сопровождаются значительным снижением или полным отсутствием агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой. Антиагрегантная терапия с использованием блокаторов P2Y12 рецепторов (клопидогрель, тиклопидин) вызывает незначительное снижение интенсивности агрегации с арахидоновой кислотой, часто прием этих препаратов на агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой вообще не сказывается. Аспирин и другие нестероидные противовоспалительные препараты ожидаемо ведут к значительному снижению интенсивности или полному отсутствию агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой. Проагрегантная терапия не ведет к повышению интенсивности и скорости развития агрегации с арахидоновой кислотой. Во всех случаях интерпретация агрегатограмм требует знания особенностей используемого оборудования.


Метод исследования
Фотометрия.


Единицы измерения
Для амплитуды агрегации и дезагрегации - % (проценты).
Для задержки развития агрегации – сек. (секунды).
Для скорости развития агрегации - %/сек (процент в секунду).


Используемое оборудование
Автоматический коагулометр «CS-2000i» («Sysmex», Япония).