302.0302. Потоковая динамическая агрегатометрия (индукторы: коллаген, адреналин)

Синонимы

Динамический анализ функции тромбоцитов, проточная агрегатометрия, исследование функции тромбоцитов в условиях гемодинамического сдвига, агрегация тромбоцитов с коллагеном и адреналином. Индуцированная агрегация тромбоцитов.

Краткое описание

Это исследование способности тромбоцитов соединяться друг с другом в агрегаты под действием индукторов агрегации – коллагена и адреналина. Исследование применяется для оценки в условиях, максимально приближенных к физиологическим, сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза, агрегантной и адгезивной функции тромбоцитов, диагностики врожденных и приобретенных тромбоцитопатий, болезни Виллебранда, риска тромбозов и кровотечений, нарушения чувствительности к аспирину и контроля за антиагрегантной терапией. Исследование агрегации тромбоцитов - единственное из всех клинических лабораторных исследований, проводимое на живых клетках.

Исследуемый биоматериал

Кровь из вены.

Подготовка к исследованию

За 30 минут перед взятием крови нужно соблюдать покой, не нервничать, не курить. Пациенту необходимо обязательно сообщить медицинскому персоналу о всех получаемых им лекарственных препаратах.

Факторы, влияющие на результаты

Определяемая в ходе исследования функциональная активность тромбоцитов, их способность к агрегации и адгезии может занижаться проводимой антиагрегантной терапией, приемом аспирина, адреноблокаторов, нестероидных противовоспалительных средств (НПВС), стероидных гормонов, ингибиторов АПФ, гормональных контрацептивов, антибиотиков, антибактериальных препаратов, антидепрессантов, мочегонных, клофибрата, дипиридамола, пропроналола. К получению завышенных результатов может приводить курение.

Подробная информация об исследовании

Агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная – увеличивает риск кровотечений. При избыточной агрегации в первую очередь нарушается проходимость капилляров и мелких сосудов. Это может привести к ухудшению кровоснабжения головного мозга и развитию инсульта.

Коллагены – одни из самых распространенных белков, к ним относится 25% всего белка в организме человека. Коллаген входит в состав межклеточного матрикса и соединительных тканей. Он образует эластичный каркас сосуда и находится под эндотелием, в так называемом субэндотелиальном слое сосудистой стенки. Пока коллаген прикрыт эндотелиальными клетками, он не оказывает влияния на свертывающую систему крови. При повреждении сосуда и нарушении целостности эндотелия, коллаген вступает в непосредственный контакт с клетками и компонентами плазмы крови, активируя гемостаз. В этих процессах большое значение имеет действие, которое коллаген оказывает на тромбоциты. Оно реализуется через рецепторы на поверхности тромбоцитов и компоненты плазмы крови.

Среди компонентов плазмы крови наиболее важные функции по взаимодействию с тромбоцитами выполняет фактор Виллебранда. Этот высокомолекулярный гликопротеид синтезируется в эндотелиальных клетках, содержится в гранулах самих тромбоцитов. Коллаген обладает высоким сродством к фактору Виллебранда. Связываясь с рецептором GPIb-V-IX на поверхности тромбоцитов и коллагеном, фактор Виллебранда играет роль молекулярного «клея», обеспечивая адгезию тромбоцитов к поврежденному участку сосудистой стенки. Это не единственный механизм тромбоцитарной адгезии. На поверхности тромбоцитов есть еще специфические рецепторы GPIa-IIb и GPVI для непосредственной связи с коллагеном. Эти рецепторы тоже обеспечивают адгезию тромбоцитов к области повреждения сосуда. Коллаген обеспечивает не только адгезию тромбоцитов. Связываясь с рецепторами GPIa-IIb, GPVI и через фактор Виллебранда с рецепторами GPIb-V-IX, коллаген интенсивно активирует тромбоциты.

Адреналин – это один из естественных физиологических активаторов тромбоцитов. В самих тромбоцитах адреналин не содержится. Агрегация тромбоцитов с адреналином в значительной мере зависит от концентрации кальция. При физиологической концентрации кальция (2,1-2,7 мМ/л) и низком фоновом содержании адреналина в крови он в естественных условиях не вызывает агрегацию тромбоцитов. Однако, даже находясь в крови в низкой концентрации, адреналин способен усиливать действие других индукторов агрегации. Такой эффект адреналин проявляет уже при концентрации выше 0,01 мкмоль/л. Нормальная концентрация адреналина в крови существенно выше и составляет <0,45 мкмоль/л. Ситуация радикально меняется при дополнительном выбросе адреналина в кровь. Стресс, кардиогенный шок, курение сопровождаются многократным (в 5-50 раз) повышением концентрации адреналина в крови. В этом случае адреналин, даже при нормальной концентрации кальция, становится самостоятельным и значимым фактором внутрисосудистой агрегации тромбоцитов.

В условиях лаборатории агрегация тромбоцитов исследуется в образце крови, содержащей цитрат натрия. Это соединение связывает кальций, что делает возможной агрегацию с адреналином. При вызванном цитратом значительном снижении концентрации кальция, адреналин в концентрации 5-10 мкмоль/л вызывает дозозависимую агрегацию тромбоцитов. Под действием адреналина на поверхности тромбоцитов появляются GPIIb-IIIa рецепторы (для фибриногена) и развивается первичная кальций-зависимая агрегация. Следует учитывать, что дозозависимый эффект адреналина на агрегацию тромбоцитов проявляется в меньшей степени, чем, например, у АДФ.

В ответ на активацию коллагеном и адреналином тромбоциты меняют свою форму, у них появляются псевдоподии (отростки). Происходит активация простагландин-тромбоксановой системы, из внутренних гранул тромбоцитов в кровь высвобождаются содержащиеся в них собственные эндогенные индукторы (фактор Виллебранда, β-тромбоглобулин, тромбоспандин, фибронектин, фибриноген, 4-й тромбоцитарный фактор, факторы свертывания V и XIII, др.), обладающие сильными проагрегантными свойствами. На поверхности активированных тромбоцитов «включаются» GPIIb-IIIa рецепторы. С помощью этих рецепторов тромбоцит связывает на своей поверхности до 40000 молекул фибриногена. Формирующиеся «фибриновые мостики» соединяют тромбоциты между собой – это основной механизм агрегации тромбоцитов.

GPIIb-IIIa рецепторы связываются не только с фибриногеном, но и с фактором Виллебранда, что важно для эффективной агрегации и адгезии тромбоцитов в условиях высокой скорости кровотока. Так адгезия к субэндотелиальным, содержащим коллаген структурам и действие коллагена на тромбоциты ведет к их рецепторной активации, выбросу индукторов из гранул хранения и, в итоге - к развитию интенсивной агрегации.

Индуцированная коллагеном и адреналином агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная – увеличивает риск кровотечений.

При потоковой динамической агрегатометрии, в отличие от оптической агрегатометрии (по Борну), используется цельная кровь. Само исследование, как следует из его названия, проводится в потоке, то есть в условиях гемодинамического сдвига, для чего используются одноразовые картриджи. Устройство картриджа моделирует агрегацию тромбоцитов в поврежденном сосуде, регистрируя время, которое занимает этот процесс.

Образование агрегатов происходит на микромембране при прохождении через нее крови под давлением. На мембрану нанесены индукторы агрегации – коллаген и адреналин. Кровь пропускается через апертуру в мембране со скоростью, имитирующей условия, в которых находятся тромбоциты в сосудистом русле. Окклюзия апертуры происходит по мере формирования тромбоцитарной «пробки» и регистрируется по изменению перфузионного давления в картридже. Это максимально приближает поточную динамическую агрегатометрию к естественным физиологическим условиям, за счет чего обеспечивается учет всех этапов межклеточных взаимодействий, активации, адгезии и агрегации тромбоцитов.

Важное преимущество потоковой динамической агрегатометрии состоит в том, что ее результат зависит не только от свойств тромбоцитов, но также их концентрации и реологических свойств крови. В отличие от оптической или импедансной агрегатометрии, потоковая динамическая агрегатометрия дает врачу количественную и визуально понятную оценку замедления сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Малое время исследования позволяет быстро получить результат, оценить риск возникновения у пациента кровотечений или тромбозов.

Показания к назначению

Обследование назначается при склонности к кровотечениям или тромбозам, диагностике болезни Виллебранда, врожденных и наследственных тромбоцитопатий, сердечно-сосудистых заболеваниях, контроле за антиагрегантной терапией.

Референсный интервал нормальных значений

82-150 секунд.

Интерпретация результата

Результатом исследования является агрегатограмма. Это график, иллюстрирующий замедление скорости кровотока через апертуру картриджа по мере образования тромбоцитарных агрегатов в процессе исследования.

Чем медленнее снижается скорость кровотока и чем позднее наступает полная окклюзия апертуры, тем более замедлен сосудисто-тромбоцитарный гемостаз. Соответственно, тем больше риск развития геморрагического синдрома, прежде всего по микроциркуляторному типу. Верно и обратное. Чем быстрее снижается скорость кровотока и чем раньше происходит полная окклюзия апертуры, тем больше риск развития тромбозов, связанных с нарушением сосудистой микроциркуляции.

Большей чувствительностью поточная динамическая агрегатометрия обладает при диагностике геморрагических нарушений, а не тромбофилий. Это связано с диапазоном изменения скорости кровотока через апертуру картриджа.

Отклонения от нормы характерны для врожденных и приобретенных тромбоцитопатий, проявляющихся нарушением адгезии и агрегации (болезнь Виллебранда, синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана, синдром Скотта, дефекты пулов хранения и др.), а также проводимой антиагрегантной терапии.

Например, при болезни Виллебранда, синдроме «серых» тромбоцитов, дефиците так называемых плотных гранул, дефиците активности тромбоцитарных фосфолипаз и тромбоксансинтетазы, тяжелой гипофибриногенемии и афибриногенемии окклюзия аппертуры картриджа замедляется в несколько раз. При тромбастении Гланцмана окклюзия апертуры не наступает за все время исследования.

Антиагрегантная терапия вызывает резкое, дозозависимое замедление окклюзии апертуры. Аспирин и другие НПВС ведут к более умеренному (по сравнению с блокаторами P2Y12 рецепторов) замедлению окклюзии апертуры. Во всех случаях интерпретация поточной агрегатометрии требует опыта и знания используемого оборудования.

Метод исследования

Анализ функции тромбоцитов методом индуцированной агрегатометрии в условиях гемодинамического сдвига.

Единицы измерения

Секунды.

Используемое оборудование

Агрегометр «PFA-200» («Siemens Healthcare Diagnostics», США)