302.0106. Исследование агрегации тромбоцитов методом оптической агрегатометрии (индуктор - ристомицин / ристоцетин, от 1 до 5 концентраций индуктора)

Исследуемый биоматериал
Кровь из вены.


Синонимы
Агрегация тромбоцитов с ристомицином. Агрегация тромбоцитов с ристоцетином. Агрегация с антибиотиком ристомицином/ристоцетином. Агрегация с аггристином. Индуцированная агрегация тромбоцитов.


Краткое описание
Это исследование способности тромбоцитов соединяться друг с другом в агрегаты под действием индуктора агрегации – антибиотика ристомицина (его второе название - ристоцетин). Исследование агрегации тромбоцитов с ристомицином используется для оценки состояния тромбоцитарного звена гемостаза, диагностики болезни Виллебранда, дифференциальной диагностики подтипов болезни Виллебранда, дифференциальной диагностики болезни Виллебранда с другими врожденными и приобретенными тромбоцитопатиями, оценки риска тромбозов и кровотечений. Исследование агрегации тромбоцитов - единственное из всех клинических лабораторных исследований, проводимое на живых клетках.


Подготовка к исследованию
Пациент не должен принимать пищу за 10-12 часов перед визитом в лабораторию, можно только пить воду без газа. За день до сдачи анализов необходимо избегать стресса, физических нагрузок, смены режима дня, питания, приема алкоголя. 30 минут перед забором крови нужно соблюдать покой, не нервничать, не курить. Пациенту необходимо обязательно сообщить медицинскому персоналу о получаемых им лекарственных препаратах.


Читать подробнее о Правилах подготовки к лабораторным исследованиям


Факторы, влияющие на результаты
Определяемая в ходе исследования функциональная активность тромбоцитов и их способность к агрегации могут занижаться проводимой антиагрегантной терапией, приемом аспирина, адреноблокаторов, нестероидных противовоспалительных препаратов, стероидных гормонов, ингибиторов АПФ, гормональных контрацептивов, антибиотиков, антибактериальных препаратов, антидепрессантов, мочегонных, клофибрата, дипиридамола, пропроналола. К получению завышенных результатов может приводить курение. Также результаты могут быть искажены при проведении исследования не натощак, уремии, парапротеинемии и нарушениях липидного обмена, сопровождающихся выраженной липемией. Ристомицин может иногда вызывать преципитацию плазменных белков, приводящую к ложноположительным результатам.


Читать подробнее о Факторах, влияющих на результат лабораторных исследований


Подробная информация об исследовании
Агрегация тромбоцитов – важный и обязательный этап свертывания крови, необходимый для формирования тромба и остановки кровотечения. Активная агрегация тромбоцитов способствует образованию тромбов, сниженная - увеличивает риск кровотечений. При избыточной агрегации в первую очередь нарушается проходимость капилляров и мелких сосудов. Это может привести к ухудшению кровоснабжения головного мозга и развитию инсульта.

Ристомицин (ристоцетин) – это антибиотик, нефизиологический индуктор агрегации. В отличие от всех остальных индукторов, применяемых для лабораторного исследования агрегации тромбоцитов, ристомицин в физиологических условиях не содержится в организме и не принимает участия в свертывании крови in vivo. Он обладает свойством стимулировать взаимодействие фактора Виллебранда с его основным тромбоцитарным рецептором GPIb-V-IX. Ристомицин связывается с участком молекулы фактора Виллебранда и с тромбоцитарным рецептором GPIb-V-IX, вызывая их изменение. Это резко увеличивает сродство между фактором Виллебранда и тромбоцитарной мембраной. Таким образом, ристомицин «склеивает» тромбоциты и фактор Виллебранда между собой.

Фактор Виллебранда – это высокомолекулярные гликопротеиды (белково-углеводные молекулы большого размера), находящиеся в выстилающих внутреннюю поверхность сосудов эндотелиальных клетках, плазме крови и тромбоцитах. Основных функций у фактора Виллебранда две:

1)           Участие в адгезии (прикреплении) тромбоцитов к области повреждения сосуда и их агрегации («слипании», «склеивании») между собой, необходимом для формирования кровоостанавливающей тромбоцитарной пробки.

2)           Защита VII-го фактора свертывания крови от преждевременной инактивации за счет его разрушения протеином С – одним из основных естественных антикоагулянтов плазмы крови. Поэтому, в нормальных условиях практически весь VIII-й фактор свертывания связан с фактором Виллебранда.

При нарушении образования или качественных изменениях фактора Виллебранда развивается болезнь Виллебранда. Сами тромбоциты при болезни Виллебранда не страдают – их количество и характеристики остаются нормальными. Однако функциональные возможности тромбоцитов по остановке кровотечений или участие в образовании тромбов претерпевают серьезные изменения. Болезнь Виллебранда бывает врожденной и приобретенной. Врожденная болезнь Виллебранда – самое распространенное геморрагическое (т.е. приводящее к повышенной кровоточивости) заболевание. Она вызывается генетическим дефектом, который встречается у 1% населения, из которых у 1/3 наблюдаются клинически значимые проявления.

Известно 3 типа болезни Виллебранда. При 1-м типе имеется частичный дефицит фактора Виллебранда. 3-й тип характеризуется его практически полным отсутствием. 2-й тип обусловлен не количественными, а качественными изменениями фактора Виллебранда и подразделяется на 4 подтипа. Существует также т.н. псевдоболезнь Виллебранда, вызываемая ускоренным удалением фактора Виллебранда из организма.

Приобретенная болезнь Виллебранда вызывается появлением ингибиторов к фактору Виллебранда. Они могут появляться на фоне онкологических и сердечно-сосудистых заболеваний, системных заболеваний соединительной ткани, гипотиреоза, приема лекарственных препаратов.

Наиболее часто болезнь Виллебранда проявляется повышенной кровоточивостью, что обусловлено уменьшением количества или качества фактора Виллебранда. Выраженность геморрагического синдрома может быть различной – от умеренных, незначительных кровотечений, до тяжелых, клинически сходных с гемофилией. Однако, при увеличении количества фактора Виллебранда могут развиваться и противоположные состояния – тромбозы.

Содержание фактора Виллебранда зависит от группы крови. У людей с 1-ой группой крови содержание фактора Виллебранда наименьшее. Известно, что 4/5 всех пациентов с болезнью Виллебранда имеют именно 1-ю группу крови. По мере «перехода» от 1-ой к 4-ой группе крови содержание фактора Виллебранда постепенно нарастает. Соответственно, возрастает и риск тромбозов, связанных с увеличением его содержания в крови. Возможно поэтому у людей с 1-ой группой крови риск венозных тромбозов и ИБС в 2 раза ниже, чем у остальных. Влияние фактора Виллебранда на развитие тромбозов, учитывая его взаимосвязь с VIII фактором свертывания, нельзя недооценивать: у людей с содержанием VIII фактора в 1,5 раза больше среднего риск тромбозов и ИБС возрастает пятикратно.

Результатом исследования является агрегатограмма. Это график, иллюстрирующий образование тромбоцитарных агрегатов в процессе исследования. Измеряются задержка развития агрегации, скорость развития агрегации, максимальная и финальная амплитуда агрегации, интенсивность дезагрегации. Каждый из этих параметров характеризуется диапазоном нормальных значений, который зависит от использованной концентрации адреналина. Диагностическое значение имеют на только их численные значения, но, в не меньшей степени, форма агрегатограммы. В зависимости от концентрации ристомицина и состояния самих тромбоцитов, их агрегация может быть обратимой или необратимой, завершенной или не завершенной. Поскольку ристомицин не приводит к высвобождению из тромбоцитов эндогенных индукторов агрегации, при его использовании вторая волна на агрегатограмме отсутствует.


Показания к назначению
Обследование назначается при склонности к кровотечениям, тромбозам, подозрении на болезнь Виллебранда, для дифференциальной диагностики подтипов болезни Виллебранда, для дифференциальной диагностики болезни Виллебранда с другими врожденными и приобретенными тромбоцитопатиями.


Референсный интервал
Индивидуален для каждого параметра агрегатограммы, зависит от действующей концентрации ристомицина и использованного оборудования. Указывается на бланке результата исследования. При тестировании стандартно используется 2 концентрации ристомицина – 1,25 мг/л и 0,5 мг/л. Концентрация 1,25 мг/л вызывает агрегацию тромбоцитов, концентрация 0,5 мг/л - нет.


Интерпретация результата
При воздействии ристомицина с концентрацией выше 1 мг/л в нормальных условиях развивается одноволновая, необратимая агрегация. Скорость развития агрегации и интенсивность дезагрегации зависит от используемой концентрации ристомицина: чем она выше, тем быстрее развивается агрегация тромбоцитов и тем меньше последующая дезагрегация. При использовании ристомицина с концентрацией менее 0,7 мг/л агрегация тромбоцитов в нормальных условиях не развивается. Таков характер агрегатограмм при использовании ристомицина у здорового человека.

Отклонения от нормы характерны для врожденных или приобретенных тромбоцитопатий, проявляющихся нарушением адгезии и агрегации (болезнь Виллебранда, синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана, синдром Скотта, дефекты пулов хранения и др.), а также проводимой антиагрегантной или проагрегантной терапии. Например, при синдроме Бернара-Сулье агрегация тромбоцитов с ристомицином снижена или вообще отсутствует. При тромбастении Гланцмана, дефекте рецептора GP Ia/IIa и GP5 (рецептор коллагена), нарушении пулов хранения, снижении активности тромбоцитарных фосфолипаз и тромбоцитарной тромбоксансинтетазы, гипофибриногенемии или афибриногенемии агрегация тромбоцитов с ристомицином соответствуют норме. Ристомицин – единственный индуктор, с которым возможна агрегация тромбоцитов при тромбастении Гланцмана. Антиагрегантная терапия с использованием блокаторов P2Y12 рецепторов (клопидогрель, тиклопидин) никак не отражается на агрегации тромбоцитов с ристомицином. Прием аспирина и других нестероидных противовоспалительных препаратов ведет к умеренному снижению интенсивности агрегации тромбоцитов с ристомицином или не влияет на нее. Проагрегантная терапия не ведет к повышению интенсивности и скорости развития агрегации с ристомицином.

Наиболее важную диагностическую информацию исследование агрегации тромбоцитов с ристомицином дает при болезни Виллебранда. При 1-ом типе болезни Виллебранда (частичный дефицит фактора) агрегация тромбоцитов с ристомицином в концентрации 1,2-1,5 мг/л нормальная или сниженная (в зависимости от концентрации фактора Виллебранда). При 3-м типе болезни Виллебранда (практически полное отсутствие фактора) агрегация тромбоцитов с ристомицином в концентрации 1,2-1,5 мг/л значительно снижена или отсутствует (в зависимости от концентрации фактора Виллебранда). Агрегация тромбоцитов с низкой концентрацией ристомицина (0,5-0,7 мг/л) при 1-м и 3-м типе болезни Виллебранда отсутствует. 2-й тип болезни Виллебранда подразделяется на 4 подтипа: 2А, 2В, 2N и 2М. При подтипе 2А агрегация с ристомицином в концентрации 1,2-1,5 мг/л снижена, при подтипе 2В и 2М – нормальная или снижена умерено, при подтипе 2N – как правило, нормальная. Агрегация тромбоцитов с низкой концентрацией ристомицина (0,5-0,7 мг/л) при 2-м типе болезни Виллебранда отсутствует, за исключением подтипа 2В. 2В подтип болезни Виллебранда – единственное состояние, при котором наблюдается агрегация с низкой концентрацией ристомицина. Псевдоболезнь Виллебранда сопровождается нормальной или умеренно сниженной агрегацией тромбоцитов с ристомицином.

Во всех случаях интерпретация агрегатограмм требует знания особенностей используемого оборудования.


Метод исследования
Фотометрия.


Единицы измерения
Для амплитуды агрегации и дезагрегации - % (проценты).
Для задержки развития агрегации – сек. (секунды).
Для скорости развития агрегации - %/сек (процент в секунду).


Используемое оборудование
Автоматический коагулометр «CS-2000i» («Sysmex», Япония).